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甲基化檢測分子生物技術(shù)服務

甲基化檢測分子生物技術(shù)服務

型號:   更新時間:2024-11-09

簡要描述:

甲基化檢測分子生物技術(shù)服務 DNA甲基化存在于大多數(shù)真核生物中,一般發(fā)生在CpG雙核苷酸中胞嘧啶的5’UTR區(qū),起調(diào)控作用。CpG的胞嘧啶大概有80%被甲基化,20%處于基因調(diào)控區(qū)的CpG島中。

品牌上海創(chuàng)凌供貨周期現(xiàn)貨
主要用途通過對疾病及正常對照樣本的靶基因進行甲基化分析,在研究腫瘤發(fā)生機制及早期診斷等方應用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,食品,化工,生物產(chǎn)業(yè)

甲基化檢測分子生物技術(shù)服務介紹

DNA甲基化存在于大多數(shù)真核生物中,一般發(fā)生在CpG雙核苷酸中胞嘧啶的5’UTR區(qū),起調(diào)控作用。CpG的胞嘧啶大概有80%被甲基化,20%處于基因調(diào)控區(qū)的CpG島中。BSP甲基化測序(Bisulfite Genomic Sequencing PCR)的原理通過對基因組DNA進行重亞硫酸鹽處理,非甲基化的胞嘧啶被脫氨基而轉(zhuǎn)變成尿嘧啶,在隨后的PCR反應中尿嘧啶轉(zhuǎn)變成胸腺嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不能被脫氨基,在反應完成時被保留,我們將擴增得到的PCR產(chǎn)物進行TA克隆測序,就可以分析甲基化發(fā)生的具體情況。該方法實驗結(jié)果準確性高,是甲基化檢測的金標準。通過對疾病及正常對照樣本的靶基因進行甲基化分析,在研究腫瘤發(fā)生機制及早期診斷等方面均具有重要的臨床意義。

甲基化檢測分子生物技術(shù)服務實驗流程

 

 

Q:常見的甲基化測定方法有哪些,優(yōu)缺點是什么?

 

常見方法

優(yōu)缺點

MSP法(Methylation-specific PCR,MSP):重亞硫酸鹽處理基因組DNA,分別設計針對甲基化和非甲基化序列的引物進行PCR。通過電泳檢測MSP擴增產(chǎn)物,如果對甲基化DNA鏈的引物能得到擴增片段,則說明該位點存在甲基化;反之,說明被檢測的位點不存在甲基化。

無需挑克隆測序,步驟簡單,但對引物設計的要求較高,容易出現(xiàn)PCR假陽性,影響實驗結(jié)果分析。

BSP法(Bisulfite sequencing PCR ,BSP):重亞硫酸處理基因組DNA,設計BSP引物擴增,將PCR產(chǎn)物克隆至T載體測序,分析CpG位點是否發(fā)生甲基化。

可明確樣本待測區(qū)段每個CG位點的甲基化程度;受實驗方法和價格因素限制無法高通量。

高分辨率熔解曲線法(High Resolution Melting ,HRM):重亞硫酸處理基因組DNA,未甲基化的胞嘧啶經(jīng)PCR擴增后轉(zhuǎn)變成胸腺嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不變,導致樣品中的GC含量發(fā)生改變后溶解溫度變化,從而進行分析。

檢測方法高通量,但是無法明確每個CG位點的甲基化程度。

 

客戶須知:

 

實物

數(shù)據(jù)信息

實驗周期

客戶提供

待測樣本

待測序列信息

7周或以上

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